中国油气开发挺进深海 赢南海开发主动权

高脂高蛋白样品暂不在研究范围内。

动物、植物组织和微生物都可以产生-L-鼠李糖苷酶，其中，微生物产-L-鼠李糖苷酶生产成本较低，且不受季节限制，应用广泛。90i全电动显微镜：株式会社尼康等

8000r/min离心10min，测定上清液的A405。移液枪吸取1mL富集培养基加入1号试管，充分振荡混匀后从1号试管吸取1mL溶液加入2号试管，依次10倍浓度梯度稀释。反应程序：94℃预变性5min。具有调节心血管系统、抗菌消炎、抗氧化、美白及机衰老等多种功能。以不添加金属离子的酶活为100%。

1.材料与方法1.1样品来源连云港市连云区海州湾高公岛海域海泥样品，置于冰盒，尽快带回进行试验。将该序列与GenBank数据库中的序列进行同源性比对，用MEGA7.0软件进行16SrDNA序列的比对分析，并构建系统发育树。-18℃避光保存，有效期3个月。

检测方式：多反应监测(MRM)。本实验采用酸化乙腈提取辅以分散固相萃取技术(QuEChERS)进行样品前处理。因此，本实验采用酸化乙腈提取，C18、GCB和PSA混合吸附剂分散同相萃取净化，UPLC-MS/MS检测9种基质(猪、牛、羊的肝脏、肾脏、肌肉)13种PFCs(包括9种PFCAs，4种PFSAs)，同位素内标法定量。标准品全氟丁烷羧酸(PFBA)、全氟戊烷羧酸(PFPeA)、全氟己烷羧酸(PFHxA)、全氟庚烷羧酸(PFHpA)、全氟辛烷羧酸(PFOA)、全氟壬烷羧酸(PFNA)、全氟癸烷羧酸(PFDA)、全氟十一烷羧酸(PFUdA)、全氟十二烷羧酸(PFDoA)、全氟己烷磺酸钠(PFHxS)、全氟辛烷磺酸钠(PFOS)、全氟癸烷磺酸钠(PFDS)、全氟十二烷磺酸钠(PFDoS)、同位素内标物13C4-PFOA(Perfluoro-n-[1，2，3，4-C4]octanoicacid，MPFOA)、同位素内标物C4-PFOS(Sodiumperfluoro-1-[1，2，3，4-C4]octanesulfonate，MPFOS)均为50g/mL标准储备液，溶剂甲醇，阴凉避光放置，加拿大Wellington公司。

上述改进的QuEChERS-LC-MS/MS方法都具有合理的回收率及较高的灵敏度，但存在样品基质类型不全或检测项日少等缺点。基于PFCs易与蛋白质结合而累积于生物体组织器官的富集特性，膳食占比较大的动物源性食品，特别是肝脏、肾脏、肌肉等蛋白质含量较高的器官组织中寓集现象普遍但含量较低(通常在g/kg级别)。

THZ-98A恒温振荡器：上海一恒公司。实验所用的动物源性食品均为市售猪、牛、羊的肝脏、肾脏、肌肉，取可食用部分绞碎并均质，取2.00g均质样品于50mL聚阿烯离心管中，待检，其余样品密封保存于-18℃冰箱中。该方法步骤简化、定量准确、灵敏度高，可广泛应于动物源性食品中多种PFCs的分析。离子传输管温度：270℃。

全氟化合物(perfluorinatedcompounds，PFCs)是化合物分子巾与碳原子连接的氢原子全部被氟原子取代并带有不同功能团的一类人工合成有机化合物。同时，国内外颁布的检测方法标准也只关注了食品中最典型的PFOA和PFOS，而对同样具有危害性的其它PFCs没有涉及。L-119A氮气吹干仪：北京来亨科贸有限公司。HPLC-MS/MS对应的前处理方法，主要采用离子对液液萃取、液固萃取、碱消解提取结合弱阴离子交换柱WAX或HLB固相萃取柱净化，但是这些传统的前处理方法步骤多、耗时长，重现性差。

HPLC-MS/MS的多反应监测模式(multi-reactionmonitoring，MRM)，背景干扰少，选择性好、检出限低，在痕量PFCs检测分析中具有显著优势。甲酸、乙酸铵色谱纯，美国FisherChemical公司。

梯度洗脱程序：0～3min，90％～40％B。T25数显型高速分散机、Vortexgenius3涡流混合器：德国IKA公司。

PFCs主要包括全氟烷基羧酸类(PFCAs)、全氟烷基磺酸类(PFSAs)、全氟烷基磺酰胺类(PFOSAs)、全氟调聚醇(FTOHs)、全氟磷酸及其酯等，其中全氟烷基辛酸(PFOA)和全氟烷基磺酸(PFOS)是两种最受关注的八碳链PFCs。扫描方式：负离子扫描。混合标准工作液的配制：分别准确移取13种PFCs标准中间液各1mL，于50mL容量瓶中，甲醇定容。基于PFCs极性大、沸点高、不能直接气化的特点，GC、GC-MS、GC-MS/MS法在分析前需要对PFCs进行衍生化，但处理过程繁琐，易引入污染和干扰物质，这使得上述三种方法在应用上受到局限。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：己烷磺酸钠，全氟辛烷磺酸钠，全氟癸烷磺酸钠，全氟十一烷羧酸。一18℃避光保存，有效期3个月。

1.2.2仪器条件1.2.2.1色谱条件色谱柱：AtlantisT3色谱柱(2.1mmx150mm，3m)。我国人群膳食暴露频繁且PFCs寓集普遍的动物源性食品(猪、牛、羊)的肝脏、肾脏、肌肉中PFCAs和PFSAs多种类PFCs同时检测的方法报道较少。

人类膳食中水产品、乳及乳制品、肉及肉制品、果蔬等均有不同程度PFCs污染。因此，快速、准确、灵敏的动物源性产品中多种类PFCs含量的检测方法可以为人群暴露于PFCs风险评估提供重要技术支持。

混合同位素内标中问液的配制：分别准确移取同位素内标中间液MPFOA1.5mL、MPFOS3mL，于50mL容嚣瓶中，甲醇定容。鉴于PFCs广泛存在性以及具有神经毒性、生殖毒性和免疫毒性等毒性效应，国内外研究学者开始关注PFCs对人体的健康风险，并普遍认为膳食暴露是人类摄入PFCs的重要途径

系列标准工作溶液的配制：准确移取13种PFCs混合标准工作液、混合同位素内标工作液适量，用甲醇配制浓度为0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10ng/mL(同位素内标MPFOA浓度为1.5ng/mL、MPFOS浓度为3.0ng/mL)的系列标准工作溶液。尽管人们已经认识到PFCs可能带来的膳食摄入风险，但国内外关于食品中PFCs的限量标准仍是空白。同时，国内外颁布的检测方法标准也只关注了食品中最典型的PFOA和PFOS，而对同样具有危害性的其它PFCs没有涉及。-18℃避光保存，有效期3个月。

全氟化合物(perfluorinatedcompounds，PFCs)是化合物分子巾与碳原子连接的氢原子全部被氟原子取代并带有不同功能团的一类人工合成有机化合物。混合同位素内标中问液的配制：分别准确移取同位素内标中间液MPFOA1.5mL、MPFOS3mL，于50mL容嚣瓶中，甲醇定容。

人类膳食中水产品、乳及乳制品、肉及肉制品、果蔬等均有不同程度PFCs污染。BiofugeStratos俞式高速冷冻离心机：美国ThermoFisherScientific公司。

QuEChERS是目前广泛应用于食品中目标物测定的方法，也已逐步应用到动物源性食品中PFCs检测，郭萌萌等采用十八烷基键合硅胶(C18)和石墨化碳黑(GCB)分散固相萃取法测定水产品中23种全氟化合物，朱萍萍等、何建附等、白文荟等采用C18、GCB和N-丙基乙二胺(PSA)3种混合吸附剂净化法测定羊肝、牛肝、猪肝和猪肉中多种全氟化合物。1.2.2.2质谱条件电喷雾离子源(ESI)。

流动相：2.5mmol/L乙酸铵-甲醇溶液(A)(2.5mmol/L乙酸铵溶液(B)。PFCs主要包括全氟烷基羧酸类(PFCAs)、全氟烷基磺酸类(PFSAs)、全氟烷基磺酰胺类(PFOSAs)、全氟调聚醇(FTOHs)、全氟磷酸及其酯等，其中全氟烷基辛酸(PFOA)和全氟烷基磺酸(PFOS)是两种最受关注的八碳链PFCs。HPLC-MS/MS对应的前处理方法，主要采用离子对液液萃取、液固萃取、碱消解提取结合弱阴离子交换柱WAX或HLB固相萃取柱净化，但是这些传统的前处理方法步骤多、耗时长，重现性差。本实验采用酸化乙腈提取辅以分散固相萃取技术(QuEChERS)进行样品前处理。

如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：己烷磺酸钠，全氟辛烷磺酸钠，全氟癸烷磺酸钠，全氟十一烷羧酸。全氟化合物的C-F共价键具有极高的化学键能，不易被水解、光解或生物降解，可在环境中持久性存在、可长距离传输、可沿生物链积累放大，是国际上备受关注的新型有机污染物。

PSA40～63m，上海安谱公司。混合同位素内标工作液：准确移取混合同位素内标中间液1mL于10mL容量瓶中，甲醇定容。

L-119A氮气吹干仪：北京来亨科贸有限公司。标准品全氟丁烷羧酸(PFBA)、全氟戊烷羧酸(PFPeA)、全氟己烷羧酸(PFHxA)、全氟庚烷羧酸(PFHpA)、全氟辛烷羧酸(PFOA)、全氟壬烷羧酸(PFNA)、全氟癸烷羧酸(PFDA)、全氟十一烷羧酸(PFUdA)、全氟十二烷羧酸(PFDoA)、全氟己烷磺酸钠(PFHxS)、全氟辛烷磺酸钠(PFOS)、全氟癸烷磺酸钠(PFDS)、全氟十二烷磺酸钠(PFDoS)、同位素内标物13C4-PFOA(Perfluoro-n-[1，2，3，4-C4]octanoicacid，MPFOA)、同位素内标物C4-PFOS(Sodiumperfluoro-1-[1，2，3，4-C4]octanesulfonate，MPFOS)均为50g/mL标准储备液，溶剂甲醇，阴凉避光放置，加拿大Wellington公司。